一直以來(lái)，業(yè)內(nèi)有個(gè)流行的觀點(diǎn)，因?yàn)楦邷貢?huì)導(dǎo)致糖降解，糖含量高的培養(yǎng)基必須在115℃滅菌，有些含糖培養(yǎng)基因此要在115℃滅菌30分鐘。難道這就是含糖培養(yǎng)基的正確滅菌姿(zhi)勢(shì)(shi)嗎？

其實(shí)高溫引起糖降解的副作用，并不是因?yàn)榻到夂髮?dǎo)致糖的含量不足，而主要是由于糖因高溫降解所產(chǎn)生的副產(chǎn)物5-羥甲基糠醛（5-HMF），對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)有抑制作用。國(guó)內(nèi)因此把乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、沙氏瓊脂等許多常見含糖培養(yǎng)基的滅菌溫度，都設(shè)定在115℃。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在國(guó)內(nèi)某培養(yǎng)基生產(chǎn)廠商的產(chǎn)品目錄中，總共有200多個(gè)品種，其中超過(guò)20%的培養(yǎng)基需要在115℃滅菌，其中大多數(shù)是含糖培養(yǎng)基，而且115℃的滅菌溫度，大都是依據(jù)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定而設(shè)置的。然而，在國(guó)外某公司的培養(yǎng)基產(chǎn)品目錄中，總共有700多個(gè)品種，需要在115℃滅菌的培養(yǎng)基不超過(guò)7種，而且在115℃滅菌并不是因?yàn)榕囵B(yǎng)基中含糖量高的緣故。這又是為什么呢？

事實(shí)上，任何一個(gè)滅菌程序的設(shè)定，都是要在保證滅菌效果與保持培養(yǎng)基性能之間達(dá)到平衡。滅菌的效果與滅菌的溫度和持續(xù)時(shí)間有關(guān)，在保證同樣滅菌效果的情況下，滅菌的溫度越高，滅菌所持續(xù)時(shí)間越短。一般認(rèn)為，培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)滅菌程序，是在121℃保持15分鐘。而要達(dá)到同樣的滅菌效果，培養(yǎng)基需在115℃，保持30分鐘。?

大量研究發(fā)現(xiàn)，糖降解產(chǎn)物5-HMF的生成量也與滅菌的溫度和持續(xù)時(shí)間有關(guān)，在保證同樣滅菌效果的情況下，溫度越高，滅菌所需的時(shí)間就越短，5-HMF的生成量也就越少。有文獻(xiàn)報(bào)道，121℃滅菌15分鐘所產(chǎn)生5-HMF，僅為115℃滅菌30分鐘產(chǎn)生5-HMF的1/5。此外培養(yǎng)基中存在的酵母膏等成分，還會(huì)減緩5-HMF的產(chǎn)生，并可中和5-HMF的抑菌作用。所以說(shuō)與產(chǎn)生的滅菌效果相比，121℃滅菌15分鐘所產(chǎn)生副產(chǎn)物的抑菌作用，基本上可以忽略不計(jì)。因此，大多數(shù)含糖培養(yǎng)基的滅菌程序，均可設(shè)定為121℃、15分鐘。

目前，還有兩種常用的培養(yǎng)基，仍需要在115℃滅菌，但不是因?yàn)槠渲刑呛扛撸怯捎谂囵B(yǎng)基中存在其他熱敏感的成分。一種培養(yǎng)基是Rappaport-Vassiliadis (RV) 肉湯，該培養(yǎng)基中維持滲透壓的氯化鎂，在加熱至118℃時(shí)，會(huì)分解形成堿式氯化鎂，堿式氯化鎂不溶于水，失去了維持滲透壓的作用。因此，RV肉湯需要在115℃滅菌。

另一種培養(yǎng)基是配方中含有硫酸亞鐵銨的三糖鐵瓊脂。為指示H2S的產(chǎn)生，三糖鐵培養(yǎng)基中必須存在游離的鐵離子。一些三糖鐵瓊脂采用硫酸亞鐵來(lái)提供游離的鐵離子，但是硫酸亞鐵在潮濕空氣中，容易氧化形成難溶于水的堿式硫酸鐵，影響了游離鐵離子的產(chǎn)生。所以有些三糖鐵培養(yǎng)基，就用硫酸亞鐵銨來(lái)替代硫酸亞鐵，因?yàn)榱蛩醽嗚F銨在空氣中比較穩(wěn)定。然而，在加熱至110℃以上時(shí)，硫酸亞鐵銨會(huì)分解，并形成難溶于水的三氧化二鐵，這也會(huì)影響游離鐵離子的產(chǎn)生。因此配方中含有硫酸亞鐵銨的三糖鐵瓊脂，也必須在115℃滅菌。

既然講到了滅菌，還是說(shuō)一說(shuō)微生物檢驗(yàn)用培養(yǎng)基最常用的滅菌方式---高溫濕熱滅菌的注意事項(xiàng)吧。

首先，在配制培養(yǎng)基時(shí)，最好將干粉培養(yǎng)基傾倒在溶液的表面，充分?jǐn)嚢?必要時(shí)加熱使之完全溶解后，再放入高壓鍋內(nèi)滅菌。此外還要注意以下幾點(diǎn)：

1、容量不要過(guò)載：待滅菌物的體積不要超過(guò)高壓滅菌鍋說(shuō)明書規(guī)定容量。一般來(lái)說(shuō)，待滅菌物的總體積，不超過(guò)高壓滅菌鍋容積的三分之二。
2、擺放不要過(guò)擠：為使待滅菌物與熱蒸汽充分直接接觸，待滅菌物的擺放不要過(guò)擠過(guò)密，以免影響熱蒸汽的流通。

3、塞子不要過(guò)緊：裝培養(yǎng)基的容器，最好配用帶排氣孔的膠塞；若是使用螺旋蓋，要將螺旋蓋旋松；使用磨砂玻璃瓶塞者，可在磨砂玻璃瓶塞與瓶口之間塞入紙片，以留出縫隙，然后再包裹瓶塞與瓶口。裝有待滅菌物品的金屬盒等容器，也不能密封蓋嚴(yán)。

4、體積不要過(guò)大：?jiǎn)蝹€(gè)容器中培養(yǎng)基的體積，最好不要超過(guò)1000毫升，以免導(dǎo)致容器中間的培養(yǎng)基滅菌不徹底。

5、排氣不要過(guò)快：滅菌液體培養(yǎng)基時(shí)，排氣速度過(guò)快，液體培養(yǎng)基會(huì)因壓力下降過(guò)快而溢出。排氣速度過(guò)快，還可造成倒置的杜漢氏發(fā)酵管中出現(xiàn)氣泡。

最后，別忘了定期用生物指示劑，監(jiān)測(cè)高壓滅菌鍋的滅菌效果哦。

最最后，還要啰嗦一句，不要高壓滅菌易爆、易揮發(fā)、有腐蝕性的物品。那種把調(diào)節(jié)樣品pH值的氫氧化鈉溶液和鹽酸溶液，拿去高壓滅菌的SHA事，就不要做了哈！

主要參考文獻(xiàn)：

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